Tinción de Giemsa: Principios, materiales, tecnología y aplicaciones

Tinción de Giemsa Se trata de una tinción de exhibe clínica fundamentada en una mezcla de tintes ácidos y básicos. Inspirado por el trabajo de Romanowsky, Gustav Giemsa, un químico y bacteriólogo alemán, lo perfeccionó agregando glicerina para estabilizar el compuesto.

Las modificaciones a la técnica original de Romanovsky mejoraron significativamente la observación microscópica, de ahí el nombre de tinción de Giemsa.

Patrones de diferentes colores con tinte Giemsa. A. Trypanosoma evansi en sangre periférica. B. células sanguíneas normales. C. Borrelia burgdorferi en sangre periférica. D. Linfoma de Burkitt.

Debido a que es una tecnología simple, poderosa y económica, en este momento se emplea extensamente en laboratorios clínicos para frotis de sangre, muestras de médula ósea y partes de tejido.

La técnica de tinción de Giemsa es realmente útil para la investigación citológica por el hecho de que deja la observación de estructuras celulares específicas. Esta técnica tiñe el citoplasma, núcleo, nucléolo, vacuolas y gránulos celulares e incluso puede distinguir sutiles trazas de cromatina.

Además, se tienen la posibilidad de ver cambios significativos en el tamaño, forma o color del núcleo, donde se puede ver la pérdida de relaciones nucleares en el citoplasma.

Por otro lado, puede identificar medula ósea inmadura y células sanguíneas periféricas, lo que es esencial para diagnosticar anomalías de la salud graves como la leucemia. Asimismo puede contener parásitos sanguíneos, bacterias extracelulares y también intracelulares, hongos, etc.

Es muy utilizado en citogenética pues deja el estudio de la mitosis celular.

La base de la coloración de Giemsa.

Los tintes Romanowsky se basan en el contraste entre el uso de tintes ácidos y básicos para conseguir la coloración de construcciones básicas o ácidas. Se encuentra que los colorantes ácidos tienen afinidad por la estructura básica del colorante y viceversa.

El colorante básico utilizado es el azul de metileno y sus derivados oxidados (Azur A y Azure B) mientras que el colorante ácido es la eosina.

La composición ácida de la célula consta de ácido nucleico, gránulos basófilos segmentados, etc., con lo que se tiñen con azul de metileno.

En este sentido, la estructura básica de una célula es la hemoglobina y ciertas partículas, como las contenidas en los eosinófilos segmentados, se tiñen con eosina.

Dado que el azul de metileno y el azul cielo, por otra parte, se identifican por tintes heterocromáticos, pueden proveer distintas tonalidades para diferentes estructuras dependiendo de su carga de polianiones.

La combinación estratégica de tintes básicos y tintes ácidos lleva a cabo una amplia gama de colores en base a las características bioquímicas de cada composición, que en las construcciones ácidas pasa por el celeste, el azul obscuro, el lavanda y el violeta.

La coloración proporcionada por la eosina es más estable y crea un color entre el naranja rojizo y el salmón.

Equipo

Materiales para la fabricación de la solución madre

Para preparar la solución madre se pesan 600 mg de colorante en polvo Giemsa, 500 ml de alcohol metílico sin acetona y 50 ml de glicerina neutra.

Preparación de la solución madre

Ponga el polvo pesado de Giemsa en el mortero. Si hay grumos, tienen que rociarse. Entonces añada una cantidad considerable de glicerina dosificadora y mezcle bien. Vierta la mezcla final en una botella ámbar muy limpia.

El resto de la glicerina se pone en un mortero. Mezclar nuevamente para quitar cualquier tinte que quede pegado a la pared de mortero y agregar al mismo frasco.

El vial se tapó y se colocó en un baño de agua a 55ºC durante 2 horas. Agite suavemente la mezcla en un baño de agua aproximadamente cada media hora.

A continuación, se dejó enfriar la mezcla para dejar en libertad el alcohol. Antes, se colocó parte del alcohol medido en un mortero para terminar de lavar el tinte restante, y luego se agregó a la mezcla con el alcohol sobrante.

La preparación debe reposar cuando menos 2 semanas para que madure. La solución madre utilizada debe filtrarse.

Para evitar la contaminación de la preparación, se recomienda transferir la una parte de uso recurrente a un pequeño vial de color ámbar con una pipeta. Ocupar siempre que se agote el reactivo.

Materiales para la preparación de resoluciones tampón.

Por otra parte, la solución tampón de pH 7,2 se prepara de la próxima manera:

Pesar 6,77 g de fosfato de sodio (anhidro) (NaHPO)Cuarto), 2,59 g de fosfato monopotásico (KH2OrdenCuarto) y hasta 1000 cc de agua destilada.

Preparación final del tinte

Para preparar la solución de tinción final, pesar 2 ml de la solución madre filtrada y combinar con 6 ml de solución tampón. Agitar la mezcla.

Un hecho relacionado a considerar es que las técnicas de fabricación de tintes pueden variar de una compañía comercial a otra.

Otros materiales precisos para teñir

Aparte de los materiales descritos, hay que contar con un puente de color, una camiseta con agua o hisopo, un portaobjetos o funda para lavar, un cronómetro para controlar el tiempo de tinción, y papel secante o algodón. Equipo de secado (gasa o algodón ). .

La tecnologia

Proceso de teñido

1) Antes de teñir, la exhibe debe alcanzar sobre un portaobjetos de vidrio limpio.

La muestra puede ser sangre, médula ósea, una sección de tejido o una exhibe cervicovaginal. Se recomienda utilizar una fina capa antes de teñir y dejar secar 1 o 2 horas.

2) Ponga todos y cada uno de los papeles para colorear en la interfaz de pintura. Siempre trabajas en exactamente el mismo orden y cada hoja está bien marcada.

3) Poner unas gotas de metanol al 100% (metanol) en el frotis y dejar accionar de 3 a 5 minutos para fijar y escurrir la muestra.

4) Deseche el metanol del portaobjetos y déjelo secar al aire.

5) Después de secar, use una pipeta para drenar la solución de tinte final hasta el momento en que cubra todo el papel. Dejar descansar 15 minutos. Ciertos autores aconsejan un máximo de 25 minutos. Depende de la sala de negocios.

6) Escurrir la mácula y adecentar el frotis con agua destilada o solución tampón 7.2.

7) Deje que el papel se seque al aire sobre el secante y alinéelo verticalmente con una almohadilla.

8) Limpie la parte posterior de la cuchilla con una gasa empapada en alcohol o hisopos de algodón para quitar las manchas.

Instalaciones públicas

La tecnología de tinción de Giemsa se usa en muchos campos que incluyen: hematología, micología, bacteriología, parasitología, citología y citogenética.

hematología

Este es la utilización más habitual de esta mancha. Se puede usar para identificar cualquier célula que se encuentra en muestras de medula ósea o sangre periférica. No solo puede estimar el número de cada serie, sino asimismo leucocitosis, leucopenia, trombocitopenia, etcétera.

Gracias a que es muy sensible a la identificación de células inmaduras, se ha asociado con el diagnóstico de leucemia aguda o crónica. Asimismo puede hacer un diagnostico anemia, como la anemia de células falciformes.

Mikolonia

En esta área, se usa por norma general para la investigación. Histoplasma (Hongo bifásico intracelular) en la exhibe de tejido.

bacteriología

Puede detectarse en el frotis de sangre teñido por Giemsa. Borrelia Una enfermedad que los pacientes llaman fiebre recurrente. Los glóbulos colorados sobran en las espiroquetas, en las muestras tomadas durante el pico de fiebre.

Por poner un ejemplo, también puede ver las bacterias dentro de la célula. RickettsiaeChlamydia trachomatis En células infectadas.

parasitología

En el campo de la parasitología, la tinción de Giemsa deja el diagnóstico de patologías parasitarias como la malaria, la enfermedad de Chagas y la leishmaniasis.

Los dos primeros parásitos Plasmodium y Tripanosoma híbrido Suceden en la sangre periférica de pacientes infectados y se tienen la posibilidad de hallar en distintas etapas según la etapa de la enfermedad.

En la investigación después de la optimización de los parásitos en la sangre, es aconsejable usar el tinte Giemsa mezclado con el tinte May-Grünwald.

Además de esto, la leishmaniasis cutánea se puede hacer un diagnostico a través de la evaluación de la exhibe de biopsia de piel teñida con Giemsa donde se encontró el parásito.

Sitolonia

La tinción de Giemsa también se usa para exámenes citológicos de muestras del canal cervical, aunque no es la técnica más utilizada.

Pero cuando los elementos son escasos, se puede usar, su función es afín a la tecnología de Papanicolaou y el valor es menor. No obstante, esto necesita la experiencia del auditor.

Citogenético

Un aspecto relacionado de la tinción de Giemsa es su capacidad para unirse poderosamente a regiones de ADN ricas en adenina y timina. Esto permite ver el ADN en distintas estados condensados ​​a lo largo de la mitosis celular.

Estos estudios son necesarios para probar la duplicación, deleción o translocación en diferentes regiones cromosómicas.

Investigación para demostrar la efectividad de la tintura de Giemsa

Cannova et al (2016) compararon tres técnicas de tinción para diagnosticar la leishmaniasis cutánea.

Para realizar esto, usaron muestras de animales de prueba (Mesocrisetus auratus) Vacunación en fase de prueba de leishmania.

El creador demuestra que la tinción de Giemsa es mayor a la tinción Pap-Mart® y Gaffney. Por consiguiente, creen que la tinción de Giemsa es un procedimiento ideal para hacer un diagnostico la leishmaniasis cutánea.

Los geniales resultados de los autores se deben a que la combinación de los tintes que conforman la mezcla de Giemsa proporciona las condiciones primordiales para un contraste favorable, de manera que se logre distinguir precisamente la estructura de los amastigotes dentro y fuera de la célula.

Otras tecnologías (Pap-mart® y Gaffney) han hecho lo mismo, pero de forma mucho más enclenque y por tanto más difícil de visualizar. Por consiguiente, se recomienda el uso de la tinción de Giemsa para el diagnóstico parasitológico de leishmaniasis.

Además, una investigación de Ramárez et al (1994) examinó las máculas de Giemsa y Lendrum en hisopos conjuntivales. Chlamydia trachomatis.

El autor descubrió que las tinciones de Giemsa y Ledrum tenían exactamente la misma especificidad, pero señaló que Giemsa era más sensible.

Esto enseña por qué razón la tinción de Giemsa es actualmente la más usada para hacer un diagnostico la infección por clamidia, especialmente en el momento en que los elementos son pocos.

Fuente: reactivo PanReac Appischem ITW. Giemsa jaspeado. Versión 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallé © s, España.

Recomendaciones para un buen teñido.

El secado de el papel no debe acelerarse. Tendrá que esperar un tiempo razonable para que se seque al aire. En unas 2 horas.

Para conseguir mejores desenlaces, tiñe inmediatamente después de 2 horas.

Para que el frotis quede mejor fijado y teñido, la exhibe debe distribuirse en el portaobjetos de manera que se mantenga una capa fina y uniforme.

La muestra de sangre preferida es de los capilares, pues el frotis son de forma directa gotitas de sangre, esto es, la muestra no contiene ningún aditivo, lo que es bueno para el cuidado de la estructura celular.

No obstante, cuando se utiliza sangre venosa, se debe usar EDTA como anticoagulante en vez de heparina, en tanto que esta última suele deformar las células.

Fallos comunes en la tinción de Giemsa

Se pueden cometer errores en esta práctica de pintar. Se destacan por cambios inesperados en el tono estructural.

De color increíblemente azul

Esto tiene la posibilidad de tener las próximas causas:

  • Frotis muy espeso
  • Sobrepasar el tiempo de teñido
  • No se puede lavar limpio.
  • Utilice reactivos con un pH mucho más prominente que el neutro (alcalino).

En estas condiciones, el tono de las próximas estructuras se distorsionará de modo que los glóbulos rojos aparecerán verdes en vez de colorado salmón, y las partículas eosinofílicas, que deberían teñirse de rojo ladrillo, se volverán azules o grises, etcétera. en el tono frecuente.

Rosa exagerada

Esto puede tener las siguientes causas:

  • Tiempo de tinción deficiente.
  • Lavados prolongados o desmesurados.
  • No seca bien.
  • Utilice reactivos ácidos fuertes.

En este caso particular, la composición, que comunmente es de color azul, es casi invisible, al tiempo que la composición de color rosa tiene una tonalidad muy exagerada.

Por servirnos de un ejemplo, los glóbulos colorados son de color colorado refulgente o naranja, la cromatina nuclear es de color rosa claro y los eosinófilos son de color colorado obscuro.

Precipitación en el frotis

Las razones tienen la posibilidad de ser:

  • Utilice portaobjetos de manera exitosa o mal lavados.
  • No permita que el frotis se seque por completo.
  • Deje el fijador bastante tiempo.
  • Lavado insuficiente al final del teñido.
  • Se usó tinte deficiente o sin filtrar.

La presencia de artefactos morfológicos.

Pueden manifestarse artefactos morfológicos en el frotis, lo que dificulta la visualización y también interpretación de la composición que existe. Es pues:

  • El género de anticoagulante usado, como B. heparina.
  • Utilice una película sucia, dañada o grasosa.

Método de almacenamiento

El tinte formulado debe guardarse a temperatura ambiente (15 25 ℃) para evitar que el tinte se precipite. Debe guardarse en un recipiente cerrado de color ámbar.

hacer referencia a

  1. Cannova D, Brito E y Simons M. Evaluación de técnicas de tinción diagnóstica para la leishmaniasis cutánea.Una caja fuerte. 2016, 20 (2): 24-29.
  2. Reactivo PanReac Appischem ITW. Giemsa jaspeado. Versión 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, España.
  3. Trámite de tinción de Clark G. (1981) 4ª edición. Williams y Wilkins.
  4. Química clínica aplicada. Tinción de Giemsa para diagnóstico in vitroEditorial: cromakit.es
  5. Las tinciones de Ramárez I, Mejía M, García de la Riva J, Hermes F y Grazioso C. Giemsa y Lendrum se usan para contrastar la validez de hisopos conjuntivales Chlamydia trachomatis. Saint-Panampol. 1994; 116 (3): 212-216.
  6. Casas-Rincón G. Micología general. 1994. 2ª edición de la Facultad Central de Venezuela, edición de biblioteca. Caracas, Venezuela.
  7. a ???? Tinción de Giemsa. a ???? Wikipedia, la enciclopedia libre1 de septiembre de 2017, 01:02 UTC. 6 de diciembre de 2018, es.wikipedia.org.

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