Agar TCBS: conceptos básicos, preparación y uso

esta Agar Es un medio sólido enormemente selectivo y diferenciado para la separación y cultivo de bacterias Vibrio, en particular Vibrio cholerae, Vibrio vulnificus Vibrio parahaemolyticus Como primordial patógeno del género.

TCBS significa tiosulfato-citrato-bilis-sacarosa. Este agar también se conoce como medio selectivo para Vibrio. La fórmula original fue construída por Nakanishi y después modificada por Kobayashi.

Agar
Se inocularon medio TCBS comercial y placas de agar TCBS de Vibrio cholerae. Fuente: Foto 1: Fotografía del creador MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India [Public domain]

Radica en extracto de levadura, peptona de carne, Aspergillus, citrato de sodio, tiosulfato de sodio, bilis de res, sacarosa, cloruro de sodio, citrato de hierro, azul de bromotimol, azul de timol y agar.

La composición deja el cultivo terminado de especies de Vibrio a partir de muestras de agua, alimentos y heces; Complementariamente Vibrio Hollis, No medrará en este ambiente. Además de esto, el medio TCBS puede cortar el desarrollo de otras bacterias asociadas, en especial coliformes.

Ya que ciertas especies de Vibrio tienen la posibilidad de causar graves problemas gastrointestinales y extra-intestinales, su diagnóstico es muy importante. Las personas se infectan primordialmente al comer alimentos crudos o poco cocidos del océano o agua contaminada, pero tampoco se infectan a través de heridas.

Por tal razón, los laboratorios clínicos tienen que agregar agar TCBS a los estudios de cultivo de heces de muestras de heces líquidas, singularmente en presencia de agua de arroz. Especialmente si el paciente asegura haber estado en contacto con agua de mar o haber comido mariscos o pescado.

establecido

El extracto de levadura, la peptona de carne y el Aspergillus son las fuentes de nutrientes de este medio. Sin embargo, el agar TCBS es un medio inadecuado para la mayor parte de las bacterias.

Su alta selectividad se consigue mediante la adición de citrato de sodio y bilis de res; Los dos son inhibidores y afirman un pH alcalino del medio, lo que limita el crecimiento de la flora acompañante y fomenta el desarrollo del medio. Vibrio cholerae, Por ejemplo especies, particularmente Vibrio cholerae Es muy sensible a los ácidos.

A su vez, el cloruro de sodio empapa el medio de equilibrio. Además de esto, gracias a su alta concentración, también se puede emplear como inhibidor que favorece el crecimiento de bacterias halófilas.

La sacarosa es un azúcar fermentable que, adjuntado con el indicador de pH azul de bromotimol y azul de timol, confiere al medio distintas propiedades. Por este motivo, el uso de este medio permite distinguir las cepas que fermentan sacarosa de las cepas que no fermentan.

La colonia de la cepa fermentadora de sacarosa es amarilla y el medio cambia de verde a amarillo debido a la producción de ácido. El no fermentador se vuelve traslúcido y el medio conserva su color original (verde).

El medio también contiene tiosulfato de sodio como fuente de azufre y citrato de hierro (III) como revelador. Los dos detallan bacterias que tienen la posibilidad de generar sulfuro de hidrógeno (gas incoloro). H2S se forma desde tiosulfato y luego tiene una reacción con citrato férrico para conformar un precipitado negro aparente.

Tras todo, el agar es el agar que le da al medio una rigidez estable.

Elaborar

Pesar 89 gramos de medio de deshidratación y disolver en 1 litro de agua destilada. Ayuda a disolver al calentar y revolver con frecuencia. La mezcla se puede cocinar hasta por 2 minutos.

El medio no se esteriliza en autoclave. Tras la disolución, colóquelo de forma directa en un plato estéril. Si se endurecen, se ponen boca abajo sobre los blísteres y se conservan en el frigorífico (2-8 ° C) hasta su empleo.

El medio preparado debe sostener un pH de 8,6 ± 0,2.

El color del medio desecado es beige claro o beige verde y el color del medio es verde bosque o verde azulado.

Es esencial precalentar la placa antes de inocular la exhibe.

usar

La exhibe mucho más comúnmente aislada de Vibrio es una materia fecal diarreica.

Si la exhibe de heces no puede inocularse inmediatamente en medio selectivo, debe transportarse en medio Cary Blair.

Para acrecentar la sensibilidad del cultivo, las heces se tienen la posibilidad de pasar en agua de peptona pH 8,4 como medio de enriquecimiento en el transcurso de un máximo de 8 horas y de allí transferirse al medio TCBS.

También debe tenerse presente que ciertas cepas de Vibrio causan sepsis en pacientes inmunodeprimidos y, por lo tanto, tienen la posibilidad de aislarse de los hemocultivos. También se tienen la posibilidad de analizar muestras de agua y alimentos del mar en el momento en que revienta la patología del cólera.

siembra

El inóculo de la exhibe de investigación debe sobresalir y la inoculación se efectúa a través de el procedimiento de tira. Las placas se incubaron a lo largo de 24 horas a 37 ° C en condiciones aeróbicas.

Presunta colonia Vibrio cholerae Son de tamaño mediano, planos, opacos, con bordes finos y amarillos gracias a la fermentación de la sacarosa.

Además la especie Vibrio alginolyticus, Cinco, de prisa, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikoviiun tanto más Vibrio vulnificusOtras especies de Vibrio clínicamente importantes, como Vibrio parahaemolyticus No fermentan la sacarosa y forman colonias de color verde oliva.

Vibrio
Inocular la placa de agar Vibrio parahaemolyticus TCBS. Fuente: isis325 Flickr

Por otra parte, conviene recordar que ciertas cepas de Oxidasa (+) Aeromonas y Plesiomonas pueden desarrollarse y conformar colonias amarillas en este medio, lo que puede confundir a los médicos; aunque algunas cepas de Pseudomonas asimismo crecen en colonias verdes, como V. Parahemólisis.

Restricción

Las pruebas de oxidasa positivas para Vibrio no tienen que realizarse en colonias conseguidas de agar TCBS ya que los resultados obtenidos van a ser falsos negativos. Conectarse al medio interfiere en buena medida con esta prueba. Por consiguiente, debe efectuarse desde subcultivos en agar sangre.

Control de calidad

Para comprobar el buen estado del medio nutriente, es necesario cultivar cepas control conocidas o certificadas y ver si su desarrollo corresponde a las características aguardadas.

Para llevar a cabo esto, puede usar las siguientes varillas:

-Vibrio cholerae Desarrollo satisfactorio (colonias amarillas, bordes translúcidos).

-Vibrio parahaemolyticus a ???? a ???? a ???? Crecimiento satisfactorio (colonia con centro verde y borde traslúcido).

-Vibrio alginolyticus A.C. 17749 - ???? - ?????? Desarrollo satisfactorio (colonia amarilla con un halo del mismo color alrededor de la colonia).

-Enterococcus faecalis Antes de Cristo 29212 Inhibición total o parcial (pequeñas colonias amarillas o translúcidas).

-Pseudomonas aeruginosa Antes de Cristo 27853â ???? a ???? Inhibido parcial o totalmente (colonias azules).

-Escherichia coli A.C. 25922 - ???? - ?????? Eliminación completa.

- Proteus mirabilis A.C. 43071 - ???? - ???? Eliminación total o parcial. (La pequeña colonia está centrada en el borde verde translúcido).

La incubación del medio no vacunado debe permanecer sin cambios.

realizar referencia a

  1. Laboratorio Difco Francisco Soria Merguizo. Agar TCBS. 2009. Libre en: f-soria.es
  2. Laboratorio de BD. BD. TCBS-Agar 2003. Disponible en: bd.com
  3. Laboratorio británico. TCBS Media. 2015. Libre en: britanialab.com
  4. Laboratorio Acumedia. Agar TCBS. 2016. Disponible en: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 números. Pan American SA Argentina.
  6. Koneman Y también., Allen S., Janda W., Schreckenberger P., Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico. 5ª edición. Pan American SA Argentina.

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